Picro-Siriusrot Färbung an Kryostatschnitten

19. Kryostatschnitte, 15um dick, auf Polysine Objektträger, lufttrocknen. Die Schnitte können bei 4 °C im Kühlschrank in einer verschliessbaren Mappe/Box aufbewahrt werden.

20. Mind. 1 h  fixieren in Fixierungsflüssigkeit nach Delaunay.

21. 5 min. färben in Coelestinblau, direkt aus Delaunay

22. 2 min. färben in Harris Hämatoxylin (Medite 41-1011-00).

23. Bläuen in handwarmem Wasser 2 min.

24. Mind. 60 min. färben in Picro-Siriusrot.

25. 96%, Abs., Abs, Xylol, mit Pertex eindecken.

Lösungen und Reagenzien

Delaunay:

Abs. Alkohol 50 ml
Aceton 50 ml
1M Trichloressigsäure, (5 g/30 ml A.dest., Merck 807) 3 ml

Coelestinblau:

Eisenalaun 45 g
Über Nacht in Aqua dest. lösen 900 ml
Coelestinblau 4,5 g


(Celestine Blue, Aldrich 206342-5G, oder Sigma C-7143)
Das Gemisch 8 min. unter ständigem Rühren kochen (starke Schaumbildung), abkühlen lassen und filtrieren,
126 ml Glycerin zugeben. Diese Lösung ist nicht unbeschränkt haltbar.
Sobald sie braun und wässrig erscheint, ist sie zu verwerfen.

Picro-Siriusrot

Siriusrot (Siriusrot F3 BA, Chroma-Gesellschaft 1A 280, Cat. Nr. 35780) 0,2% in gesättigter Pikrinsäure, (15 g Pikrinsäure in 950 ml Aqua dest. lösen). Lösung muss auf einem Satz ungelöster Pikrinsäure stehen.
Fertige Lösung zum reifen zwei Tage stehen lassen.
Siriusrotkonzentration sehr genau einstellen. Die Lösung ist gut haltbar. Wenn
nur schwache Orange-Färbung auftritt, ist die Pikrinsäure nicht gesättigt, (auf Pikrinsäure
Bodensatz achten). In diesem Fall mehr Pikrinsäure zugeben und 24 Std. stehen
lassen.

Resultat

Kollagenes Bindegewebe rot, Muskulatur gelb, Kerne schwarzbraun

Unbefriedigendes Ergebnis

Wird die Muskulatur bei der Färbung rot, sollte mehr Trichloressigsäure der Delaunay Lösung zugegeben werden. Trichloressigsäure kann mit der Zeit zerfallen und wirkungslos werden. Ursache einer Rotfärbung der Muskulatur kann auch eine zu geringe Pikrinsäurekonzentration verursachen, auf Pikrinsäure Bodensatz der Siriusrotlösung achten.